Como Hacer Un Mapa De Restriccion
Un mapa de restricción es una representación física de un fragmento de ADN que muestra las posiciones relativas de los sitios de corte de enzimas de restricción.
Aquí te explicamos cómo crear uno:
- Paso 1: Digiere tu ADN con enzimas individuales. Realiza digestiones enzimáticas separadas usando diferentes enzimas de restricción. Por ejemplo, digiere una muestra de ADN con EcoRI y otra con HindIII. Si EcoRI corta el ADN en dos fragmentos de 2kb y 3kb, y HindIII en un fragmento de 5kb, esto nos da información inicial sobre dónde cortan estas enzimas.
- Paso 2: Digiere tu ADN con una combinación de enzimas. Realiza una digestión doble usando las mismas enzimas de restricción que en el paso 1 (EcoRI y HindIII, por ejemplo). Esto generará fragmentos que informarán sobre la relación posicional entre los sitios de corte. Supongamos que la digestión doble produce fragmentos de 1kb, 2kb y 2kb.
- Paso 3: Realiza una electroforesis en gel. Carga y corre las muestras digeridas (individualmente y en combinación) en un gel de agarosa. La electroforesis separa los fragmentos de ADN por tamaño; los fragmentos más pequeños viajan más rápido.
- Paso 4: Determina el tamaño de los fragmentos. Visualiza el gel teñido con bromuro de etidio (u otro tinte de ADN) y compara el patrón de bandas con un marcador de tamaño de ADN (ladder). Esto te permitirá estimar el tamaño de cada fragmento.
- Paso 5: Construye el mapa. Usando la información obtenida de las digestiones individuales y combinadas, deduce las posiciones relativas de los sitios de corte de las enzimas de restricción. En nuestro ejemplo, si la digestión doble generó fragmentos de 1kb, 2kb y 2kb, esto sugiere que EcoRI y HindIII cortan a 1kb de distancia. Dibuja un esquema lineal del ADN, indicando la posición de cada sitio de corte.
Aplicaciones: Los mapas de restricción son cruciales para clonar genes, identificar mutaciones y en el diseño de experimentos de secuenciación.
